Products

De analyze fan proteome-brede fosforylaasje-eveneminten is noch altyd in grutte analytyske útdaging fanwegen de enoarme kompleksiteit fan proteinfosforylaasjenetwurken.Yn dit wurk evaluearje wy de komplementariteit fan Lys-N, Lys-C, en trypsin oangeande har fermogen om by te dragen oan 'e globale analyze fan it phosphoproteome.In ferfine ferzje fan sterke kation-útwikseling mei lege pH waard brûkt om effisjint N-terminaal acetylearre, phosphorylearre en net-modifisearre peptiden te skieden.In totaal fan 5036 net-oerstallige phosphopeptides koene wurde identifisearre mei in falske ûntdekkingsnivo fan <1% fan 1 mg proteïne mei in kombinaasje fan de trije enzymen.Us gegevens die bliken dat de oerlaap tusken de phosphopeptide-gegevenssets generearre mei ferskate proteasen marzjinaal wie, wylst de oerlaap tusken twa likense generearre tryptyske gegevenssets op syn minst 4 kear heger waard fûn.Op dizze manier makke it parallelle gebrûk fan Lys-N en trypsin in ferheging fan 72% yn it oantal ûntdutsen fosfopeptiden yn fergeliking mei trypsine allinich, wylst in trypsine-replikaat eksperimint allinich late ta in ferheging fan 25%.Sadwaande, doe't wy allinich op 'e trypsin- en Lys-N-gegevens rjochte, identifisearren wy 4671 net-oerstallige fosfopeptiden.Fierdere analyze fan 'e ûntdutsen siden lieten sjen dat de Lys-N- en trypsin-gegevenssets waarden ferrike yn signifikant ferskillende phosphorylaasjemotiven, wat fierder bewiist dat multiprotease-oanpak tige weardefol binne yn phosphoproteome-analyzes.