Products

Nije high-performance floeistofchromatografy assay foar glycosyltransferases basearre op derivatization mei anthranilic acid en fluorescence detection.

Assays waarden ûntwikkele mei help fan de unike labeling skiekunde fan 2-aminobenzoic acid (2AA; anthranilic acid, AA) foar it mjitten fan aktiviteiten fan sawol β1-4 galactosyltransferase (GalT-1) en α2-6 sialyltransferase (ST-6) troch hege prestaasjes floeistof chromatography (HPLC) mei fluorescence detection (Anumula KR. 2006. Foarútgong yn fluorescence derivatization metoaden foar hege-optreden floeibere chromatography analyze fan glycoprotein koalhydraten. Anal Biochem. 350: 1-23).N-acetylglucosamine (GlcNAc) en N-acetyllactosamine waarden brûkt as akseptors en uridine diphosphate (UDP) -galactose en cytidine monophosphate (CMP) -N-acetylneuraminic acid (NANA) as donateurs foar respektivelik GalT-1 en ST-6.Enzymatyske produkten waarden yn situ markearre mei AA en waarden skieden fan 'e substraten op TSKgel Amide 80-kolom mei normale faze-betingsten.Enzyme-ienheden waarden bepaald út 'e peakgebieten troch ferliking mei de tagelyk derivatisearre noarmen Gal-β1-4GlcNAc en NANA-α2-6 Gal-β1-4GlcNAc.Lineariteit (tiid en enzymkonsintraasje), krektens (intra- en interassay) en reprodusearberens foar de assays waarden fêststeld.De assays waarden fûn nuttich te wêzen by it kontrolearjen fan de enzymaktiviteiten tidens isolaasje en suvering.De assays wiene heul gefoelich en diene gelyk oan of better as de tradisjonele radioaktive sûker-basearre mjittingen.It assayformaat kin ek brûkt wurde foar it mjitten fan 'e aktiviteit fan oare transferasen, op betingst dat de koalhydraatakseptors in ferminderjend ein befetsje foar etikettering.In assay foar glycoprotein-acceptors waard ûntwikkele mei IgG.In koarte HPLC profilearring metoade waard ûntwikkele foar de skieding fan IgG glycans (biantennary G0, G1, G2, mono- en disialylated), dy't fasilitearre de bepaling fan GalT-1 en ST-6 aktiviteiten op in flugge manier.Fierder soe dizze profileringsmetoade nuttich wêze moatte foar it kontrolearjen fan de feroaringen yn IgG-glycanen yn klinyske ynstellings.