Products

Om spesifyk ferskate metaboliten fan 5-fluorouracil (5-FU) en twa endogene monofosfaatnukleotiden te kwantifisearjen, ûntwikkele wy in orizjinele metoade basearre op in floeistofchromatografy-tandem massaspektrometrie (LC-MS / MS).Dizze assay tastien de bepaling fan: (i) de intracellular produksje fan 5-fluoro-2'-deoxyuridine-5'-monofosfaat (5-FdUMP) út 5-FU of 5-fluoro-2'-deoxyuridine (5-FdUrd) , (ii) de ynfloed fan 5-FdUMP-konsintraasje op 'e intracellular 2'-deoxyuridine-5'-monofosfaat (dUMP) / thymidine-5'-monofosfaat (TMP) ferhâlding, en (iii) de sekretaris fan 5-FdUMP en 5-FU fan minsklike kultivearre sellen troch ABC-transporters.Under ús eksperimintele omstannichheden waarden sellen ynkubeare mei 5-FU of 5-FUrd.Dêrnei waarden sellulêre aaiwiten precipitearre troch methanol.Dizze proseduere levere hege ekstraksjeherstel.Derneist, om 5-FU- en 5-FdUMP-sekresje fan sellen te mjitten, hawwe wy kwantifikaasje fan dizze molekulen yn kultuermedium útfierd.Media waarden of direkt ynjeksje (5-FU) of ûnder gie in fêste faze-ekstraksje mei Oasis Wax-ekstraksje-cartridge (5-FdUMP).Skieding fan analyten waard útfierd op in dC18 Atlantis 3.5 μm, (100 mm × 2.1 mm id) kolom mei isokratyske modus mei ammoniumformiatebuffer / methanol / wetter (5/5/90, v / v) as mobile faze.De rintiid wie net mear as 6,2 min.De analyten waarden ionisearre yn in elektrospray-ynterface ûnder negative ion-modus.Wy validearre de metoade oer in berik fan 2.5-150 ng mL -1 neffens de ferbiningen.Intra- en inter-assay fariabiliteit wie leger as 10% oer sân dagen.Alle ferbiningen wiene stabyl yn sellen as yn kultuermedium as samples op syn minst twa wiken op -20 ° C waarden opslein, en nei trije freeze-thaw-syklusen.Gjin matrix-effekt waard waarnommen yn beide media.